ProteanFect：小鼠原代T細(xì)胞從提取到轉(zhuǎn)染全流程攻略
更新時(shí)間：2025-01-15 點(diǎn)擊次數(shù)：2655
小鼠原代T細(xì)胞一般從脾臟組織中得到，包括脾臟研磨、細(xì)胞分離、純化T細(xì)胞等步驟。以下是常用的小鼠原代T細(xì)胞提取流程：
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
材料與試劑：新鮮小鼠脾臟、PBS緩沖液、無(wú)菌手術(shù)器械（剪刀、鑷子等）、細(xì)胞過(guò)濾器、CD4/CD8磁珠分選試劑（如需純化特定亞型），或陰選的方式去除B細(xì)胞、單核細(xì)胞、NK細(xì)胞的磁珠分選試劑，RPMI-1640培養(yǎng)基，人白介素2，胎牛血清，抗生素（如青霉素-鏈霉素）。
設(shè)備：無(wú)菌操作臺(tái)、離心機(jī)、磁力分選架。
從小鼠脾臟獲取單細(xì)胞懸液
小鼠頸椎脫臼處死，75%乙醇浸泡5分鐘，取出小鼠置于無(wú)菌操作臺(tái)上，左腹側(cè)朝上。
在小鼠左腹側(cè)中部剪開(kāi)小口，撕開(kāi)皮膚暴露腹壁，可見(jiàn)紅色長(zhǎng)條狀脾臟。
在脾臟下側(cè)提起腹膜，剪開(kāi)后上翻，暴露脾臟，用鑷子提起脾臟，眼科剪分離下面的結(jié)締組織，取出脾臟，剝?nèi)ブ車(chē)慕Y(jié)締組織，期間用含有2%FBS的PBS溶液保持脾臟濕潤(rùn)。
將脾臟放于70UM過(guò)濾網(wǎng)中，用注射器針芯輕輕研壓脾臟，用含2%FBS的PBS沖洗過(guò)濾網(wǎng)，獲細(xì)胞懸液。
300G離心5分鐘，收集細(xì)胞沉淀，然后加入紅細(xì)胞裂解液裂解，將紅細(xì)胞充分裂解，收集白細(xì)胞。
從單細(xì)胞懸液中分離小鼠原代T細(xì)胞
全T細(xì)胞分離：利用陰選的方式去除B細(xì)胞、單核細(xì)胞、NK細(xì)胞等，按照分選試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。
亞群分離（如需要CD4+或CD8+ T細(xì)胞）：
培養(yǎng)與檢測(cè)
將分離的T細(xì)胞重懸于含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，并加入抗生素與人白介素2。
細(xì)胞密度一般控制在1-2×10^6 CELLS/ML，放入37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
轉(zhuǎn)染
西湖凝聚體推出針對(duì)小鼠原代T的PT03 PROTEANFECT MAX小鼠原代T細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒。使用ProteanFect Max遞送EGFP mRNA至小鼠原代T細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)高效表達(dá)。
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