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    一、序言
    體細胞治療是指應(yīng)用人的自體、同種異體或異種（非人體）的體細胞，經(jīng)體外操作后回輸（或植入）人體的治療方法。這種體外操作包括細胞在體外的傳代、擴增、篩選以及藥物或其他能改變細胞生物學(xué)行為的處理。經(jīng)過體外操作后的體細胞可用于疾病的治療，也可用于疾病的診斷或預(yù)防。體細胞治療具有多種不同的類型，包括體內(nèi)回輸體外激活的單個核白細胞如淋巴因子激活的殺傷細胞（LAK）、腫瘤浸潤性淋巴細胞（TIL）、單核細胞、巨噬細胞或體外致敏的殺傷細胞（IVS）等等；體內(nèi)移植體外加工過的骨髓細胞或造血干細胞；體內(nèi)接種體外處理過的腫瘤細胞（瘤苗）；體內(nèi)植入經(jīng)體外操作過的細胞群如肝細胞、肌細胞、胰島細胞、軟骨細胞等等。

    由于體細胞治療的zui終制品不是某一種單一物質(zhì)而是一類具有生物學(xué)效應(yīng)的細胞，其制備技術(shù)和應(yīng)用方案具有多樣性、復(fù)雜性和特殊性，因此不能象一般生物制品那樣制訂出適合于每一種方案的具體標(biāo)準(zhǔn)，本指導(dǎo)原則只提出一個共同的原則，具體的申報資料和應(yīng)用方案應(yīng)根據(jù)本技術(shù)指導(dǎo)原則加以準(zhǔn)備、申請和實施。對每個方案的整個操作過程和zui終制品必須制定并嚴(yán)格執(zhí)行（實施）標(biāo)準(zhǔn)操作程序，以確保體細胞治療的安全、有效。

    二、申報資料
    （一）體細胞治療制劑的名稱、選題目的與依據(jù)、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀或生產(chǎn)使用情況
    1．申請表
    2．體細胞治療制劑的名稱及命名依據(jù)
    3．選題的目的和立題依據(jù)
    4．國內(nèi)外有關(guān)該制劑的研究現(xiàn)狀、生產(chǎn)及臨床應(yīng)用情況（包括查詢情況）
    5．臨床應(yīng)用的風(fēng)險性評估

    （二）體細胞的采集、分離和檢定
    1．體細胞類型和供體的情況
    （1）體細胞類型
    須指出細胞來源是屬于自體、同種異體、異種還是細胞系。必須提供細胞的組織來源及細胞類別的確證資料，其中包括形態(tài)生化或表面標(biāo)志等。

    （2）供體
    若體細胞來源于同種異體，需說明供體的年齡、性別，供體必須符合國家對獻血員的要求，并提供測試的方法及符合條件的依據(jù)。供體必須經(jīng)過檢驗證明HBV抗原、抗HCV、抗HIV-1/2、梅毒抗體、細菌、霉菌均為陰性，必要時需說明供體的既往病史、家族史等臨床資料。對于那些需通過激活體內(nèi)免疫功能發(fā)揮作用或需體細胞在體內(nèi)長期存活的體細胞治療項目，除ABO血型外，還必須對供體做HLA-I類和II類分型檢查，并證明與受體（病人）相匹配，同時提供檢測方法和依據(jù)。
    若體細胞來源于動物，必須提供動物的來源，遺傳背景，健康證明（如重要病原體，包括人畜共患疾病的病原體），飼養(yǎng)條件，應(yīng)用此類體細胞的必要性和安全性。

    （3）細胞系
    若采用細胞系進行體細胞治療，應(yīng)按國家相關(guān)規(guī)定進行主細胞庫、種子細胞庫及生產(chǎn)細胞庫三級細胞庫的建立及管理。應(yīng)詳細記述細胞的來源、鑒別標(biāo)志、保存、預(yù)計使用壽命，在保存和復(fù)蘇條件下穩(wěn)定性的依據(jù)。生產(chǎn)細胞庫不應(yīng)含有可能的致癌因子，不應(yīng)含有感染性外源因子，如細菌、霉菌、支原體及病毒。

    2．體細胞的采集
    應(yīng)對采集體細胞的技術(shù)方法的安全性、可行性、穩(wěn)定性進行充分論證，應(yīng)提供體細胞采集技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，應(yīng)說明采集體細胞的地址/環(huán)境，所用的設(shè)備和設(shè)施、保存和運輸?shù)沫h(huán)節(jié)和條件，預(yù)防微生物及病毒等有害因子污染的方法，預(yù)防共用設(shè)備和設(shè)施可能帶來的交叉污染等措施。

    3．體細胞的分離
    應(yīng)詳細規(guī)定分離體細胞用的方法、材料及設(shè)備，應(yīng)提供在此過程中所用的各種材料的資料，如果是購買的原材料，應(yīng)有供應(yīng)商/制造商提供的產(chǎn)品說明及分析合格證明。
當(dāng)應(yīng)用單克隆抗體進行有關(guān)操作時，應(yīng)參照國家藥品管理當(dāng)局有關(guān)規(guī)定進行。

    4．體細胞的檢定
    在體細胞采集及分離過程中的適當(dāng)階段，應(yīng)對體細胞進行質(zhì)控檢定，包括采集與分離體細胞的收率、存活率、純度、均一性等。應(yīng)詳細說明檢定體細胞所用的方法、材料及設(shè)備，并制定合格標(biāo)準(zhǔn)。

    （三）體細胞的體外操作
    1．培養(yǎng)基
    （1）所有成分應(yīng)有足夠純度（例如水應(yīng)符合注射用水標(biāo)準(zhǔn)），殘留的培養(yǎng)基或受者不應(yīng)有明顯影響。每個培養(yǎng)細胞的部門應(yīng)保證所用的各種成分的質(zhì)量都經(jīng)過鑒定，并制定標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格。若用商業(yè)來源的培養(yǎng)基，應(yīng)由廠商提供全部培養(yǎng)基成分資料。

    （2）血清的使用
    除能證明體細胞培養(yǎng)或激活需要血清外，應(yīng)避免使用任何血清。不得使用同種異體人血清或血漿。如必須使用動物血清，應(yīng)考慮每批血清都應(yīng)對潛在的外源因子（包括人的病原體）進行檢查、篩選。例如，牛血清應(yīng)進行病毒和支原體污染的檢查篩選等。

    （3）人血液成份的應(yīng)用
    若培養(yǎng)基中含有人的血液成份，如白蛋白及轉(zhuǎn)鐵蛋白，應(yīng)說明其來源、批號、質(zhì)量檢定合格報告，應(yīng)盡可能用已批準(zhǔn)上市的產(chǎn)品。

    （4）條件培養(yǎng)基的應(yīng)用
    在體細胞培養(yǎng)中使用細胞培養(yǎng)來源的條件培養(yǎng)基時，有可能增加了制劑的危險性及降低產(chǎn)品的一致性。因此，盡可能確定條件培養(yǎng)基的必要成份，以及嘗試用確定的試劑取代條件培養(yǎng)基。在應(yīng)用條件培養(yǎng)基時應(yīng)考慮以下幾點：
    ①應(yīng)詳細提供條件培養(yǎng)基的來源、加工及使用說明。
    ②當(dāng)用供者（人）細胞制備條件培養(yǎng)基時，應(yīng)對供者按獻血員標(biāo)準(zhǔn)進行傳染因子的檢查。
    ③當(dāng)用自體細胞制備條件培養(yǎng)基時，應(yīng)減少傳播病毒性疾病的危險，病毒在體外擴增的能力亦應(yīng)考慮。

    （5）抗生素的應(yīng)用
    培養(yǎng)基中盡量避免使用內(nèi)酰胺類抗生素。若采用青霉素類抗生素，應(yīng)做青霉素皮試，該細胞制劑應(yīng)標(biāo)明加用的抗生素，并不得用于已知對該藥過敏的患者。另外，應(yīng)做不加抗生素的培養(yǎng)對照，以證明能夠保持無菌。

    （6）其他成份
    應(yīng)充分說明體細胞培養(yǎng)和激活時所采用的有絲分裂原、抗體、細胞因子、化學(xué)物質(zhì)，以及培養(yǎng)物。應(yīng)盡可能采用國家批準(zhǔn)臨床應(yīng)用的產(chǎn)品。如上述成份的生產(chǎn)廠家已獲國家批準(zhǔn)臨床應(yīng)用，可以引用該批件。如上述成份的生產(chǎn)廠家未獲國家批準(zhǔn)臨床應(yīng)用，應(yīng)參照國家對相應(yīng)產(chǎn)品的質(zhì)控要點，提供質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并對每批產(chǎn)品提供詳盡的質(zhì)量檢定報告。

    （7）培養(yǎng)基的檢定
    對每批制成的培養(yǎng)基（例如已加入血清及生長添加物等）應(yīng)進行無菌試驗，以及對擬給病人用的體外培養(yǎng)細胞的激活及/或支持生長試驗。

    2．生產(chǎn)過程
    生產(chǎn)部門對制備工藝流程應(yīng)有詳細的標(biāo)準(zhǔn)操作程序和適時修訂的程序。收獲時應(yīng)保留細胞及培養(yǎng)基樣品，供檢定用。若細胞培養(yǎng)技術(shù)有改進，則應(yīng)評估對細胞得率、生物學(xué)效應(yīng)、均一性及純度的影響。
    應(yīng)敘述保證細胞批同一性和防止交叉污染的質(zhì)量控制系統(tǒng)，以及適用于長期培養(yǎng)時定期進行的和在體外培養(yǎng)后輸注前對所有培養(yǎng)物進行的質(zhì)量控制系統(tǒng)。

    3．質(zhì)量控制
    應(yīng)對所有成份分離、培養(yǎng)及zui后處理細胞所用的器具進行質(zhì)量控制。各種成份都應(yīng)進行同一性及污染物檢查。有生物活性的成份還應(yīng)進行功能檢定。批記錄應(yīng)予保存，該記錄應(yīng)反映制備每批體細胞的所有步驟，記載每一成份的批號及所有檢定結(jié)果。

    （四）體細胞制劑的檢定與質(zhì)量控制
    各批體細胞的檢定包括為驗證操作過程對zui初數(shù)批體細胞所進行的檢定及在操作過程做任何改變后進行的檢定，以及確定安全性和生物學(xué)效應(yīng)等對每批體細胞所進行的檢定，應(yīng)依據(jù)實施方案制定合格標(biāo)準(zhǔn)。
    1．每批體細胞的檢定
    （1）得率及存活率：于回輸前應(yīng)進行體細胞得率及存活率檢定。
    （2）每批細胞來源的確認(rèn)：應(yīng)注明供者的來源并加以標(biāo)記或確定批號。
    （3）無菌試驗：每批培養(yǎng)的體細胞在患者輸注前均應(yīng)進行無菌試驗。建議在培養(yǎng)開始后3～4天起每間隔一定時間取培養(yǎng)液樣品，包括患者回輸前24小時取樣，按現(xiàn)行版《中國藥典》生物制品無菌試驗規(guī)程進行。在患者使用前，取培養(yǎng)液及/或沉淀物用丫啶橙染色或革蘭染色，追加一次污染檢測。

    進行長期培養(yǎng)的體細胞，應(yīng)進行支原體檢查。對大多數(shù)自體體細胞產(chǎn)品而言，有效期很短，因此有些試驗（如支原體檢測）可能對制品的應(yīng)用來說耗時太長，但每批制品的留樣檢測是必需的，其結(jié)果可以為制品的質(zhì)量控制提供完整資料。雖然單個病人應(yīng)用的體細胞不會等到檢測完成后再回輸，但是如果留樣發(fā)現(xiàn)陽性結(jié)果或發(fā)現(xiàn)幾次陽性結(jié)果后，應(yīng)及時對生產(chǎn)過程進行檢查。如果在體細胞制備的早期發(fā)現(xiàn)有污染的情況，應(yīng)終止該批體細胞制品的繼續(xù)制備。如果某些檢測結(jié)果在制品應(yīng)用時還無結(jié)果，應(yīng)說明可獲得結(jié)果的時間。

    （4）體細胞的純度與均一性
    在體細胞回輸前，應(yīng)證明其純度和均一性已達到可應(yīng)用水平。
對于經(jīng)過數(shù)代培養(yǎng)的體細胞應(yīng)進行細胞的鑒定及無污染檢查，以保證未被其他類型細胞污染或取代。
    對于體細胞體外操作中所用的非人用成份應(yīng)測定其成品中的含量，并制定相應(yīng)的*。

    （5）生物學(xué)效應(yīng)
    如有可能，應(yīng)盡量檢測每批體細胞的生物學(xué)效應(yīng)，例如體細胞具有的某種生物學(xué)功能，分泌某種產(chǎn)物的能力，表達某種標(biāo)志的水平等。

    2．體細胞制劑的檢定（申報臨床前完成）
    檢定項目：
    （1）體細胞制品的得率和存活率：
    （2）體細胞制品的純度和均一性或特征性表面標(biāo)志：
    （3）體細胞制品的生物學(xué)效應(yīng)；
    （4）體細胞制品外源因子的檢測包括：
    ·細菌
    ·真菌
    ·支原體
    ·病毒
    ·內(nèi)毒素
    （5）體細胞制品其他添加成份殘余量的檢測（如牛血清蛋白、抗體、血清、抗生素、固相微粒等）。

    3．體細胞制劑的制造及檢定過程，及原始記錄和中國藥品生物制品檢定所的復(fù)核檢定報告。

    4．體細胞制劑的穩(wěn)定性
    根據(jù)穩(wěn)定性的實驗結(jié)果確定有效期，說明體細胞制劑的保存條件、保存液的成份與配方。如果體細胞在處理之前、處理當(dāng)中或處理之后需由一地運到另一地，應(yīng)說明運輸條件對保存體細胞存活率和功能的影響，應(yīng)確保運輸過程中體細胞制品達至上述檢定標(biāo)準(zhǔn)。應(yīng)提供運輸容器能適用運輸材料的合格證明。若體細胞制品經(jīng)凍存后繼續(xù)用于病人。應(yīng)在凍融或再擴增后進行上述檢定，達到檢定標(biāo)準(zhǔn)。

    （五）體細胞治療的臨床前試驗
    1．安全性評價
    （1）生長因子依賴性細胞，對其生長行為必須予以監(jiān)測，若某細胞株在傳代過程中失去對該生長因子的依賴，不能再予以使用。

    （2）對同種異體細胞的移植，必須從免疫學(xué)方面提供其安全性依據(jù)。

    （3）對異種細胞，必須提供該異種細胞在體內(nèi)存活的時間及安全性的依據(jù)。

    （4）毒性試驗
    盡可能模擬臨床回輸方式，高于臨床用量的相同組織類型的動物體細胞制品回輸入動物體內(nèi)，觀察其毒性反應(yīng)、過敏反應(yīng)、局部刺激反應(yīng)。對特殊來源的體細胞，按具體情況制定毒性反應(yīng)的評價方法。

    （5）致癌試驗
    對于某些長期培養(yǎng)的體細胞，應(yīng)進行致癌性試驗。
    ①體外試驗：軟瓊脂克隆形成試驗
    ②體內(nèi)試驗：采用裸鼠試驗，按國家藥品管理當(dāng)局有關(guān)細胞株檢定和質(zhì)量控制要求進行，應(yīng)證明經(jīng)體外處理后已失去生長和增殖能力。

    （6）對于體細胞終制品所用的附加物，應(yīng)視為體細胞制品的一部分，應(yīng)做動物毒性試驗。

    2．有效性評價
    （1）體細胞的表型
應(yīng)提供該類體細胞的形態(tài)學(xué)、表面標(biāo)志等，該體細胞應(yīng)具有預(yù)期的功能如分泌某種產(chǎn)物（或因子），可通過體外試驗加以檢測。

    （2）體外試驗
    檢測體細胞制品的生物學(xué)效應(yīng)如細胞毒效應(yīng)、免疫誘導(dǎo)/增強或抑制效應(yīng)、造血細胞增殖能力等。

    （3）體內(nèi)試驗
    如果有可能以動物模型來進行，臨床前試驗應(yīng)測定體細胞制品在體內(nèi)生物學(xué)功能及其治療效果。
    若某種體細胞治療方法，因種屬特異性等原因無法用動物模型體內(nèi)試驗來證實其有效性，應(yīng)做特別說明，并提供和引證有效性的其它依據(jù)。

    （六）體細胞治療臨床試驗方案
    1．臨床試驗方案除參照國家有關(guān)臨床研究的規(guī)定外，必須包括所選用的病種、病人的年齡范圍、性別、疾病的發(fā)展階段（臨床分期）、試用的病例數(shù)、事前制定病例選擇與淘汰的標(biāo)準(zhǔn)。

    2．給藥的方式、劑量、時間及療程。如果通過特殊的手術(shù)條件導(dǎo)入治療制品，必須提供詳細的操作過程。

    3．評估療效的客觀標(biāo)準(zhǔn)，包括臨床指和實驗室檢測項目。

    4．評估毒副作用及其程度的標(biāo)準(zhǔn)及終止治療的標(biāo)準(zhǔn)、以及監(jiān)控毒副作用必須的臨床與實驗室檢測的項目。

    （七）研制及試用單位及負責(zé)人資格認(rèn)證
    提供研究與臨床單位的全部主要研究人員和臨床工作人員（包括負責(zé)醫(yī)師、護士和實驗室操作人員）的工作簡歷及從事與實施該項體細胞治療方案有關(guān)的經(jīng)驗。提供研究單位從事符合GMP生產(chǎn)臨床制品的條件和證明以及臨床單位實施該方案的醫(yī)療條件。

    （八）體細胞治療倫理學(xué)考慮
    詳細要求參見國家藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的GCP有關(guān)規(guī)定。

                                                     ——華雅干細胞整理上傳