品名：Cygnus 宿主細胞蛋白ELISA檢測試劑盒 96T
貨號：F550
規(guī)格型號：96T/盒
產(chǎn)品介紹：
CHO HCP是第三代ELISA試劑盒，比之前試劑盒具有更廣泛HCP反應(yīng)性。新型試劑盒在檢測CHO HCPs 蛋白方面有很多改進。新試劑盒具有更高的靈敏度，在抗體物和其它CHO表達蛋白中檢測HCP蛋白可以準(zhǔn)確到到十億分之一百。第三代ELISA試劑盒經(jīng)過大 量藥物原料和中試樣品檢測評估，是工藝開發(fā)和大量釋放試驗檢測的通用方法?？贵w反應(yīng)性使用傳統(tǒng)2D 蛋白雜交技術(shù)（2D HPLC-ELISA）鑒定。2D HPLC-ELISA方法顯示抗體對超過750種HCPs都具有反應(yīng)性。用蛋白檢測方法和ELISA正交試驗表明這些多達750種的宿主細胞蛋白意味著高 于98%的蛋白種類均可用ELISA方法檢測到。因此，這種抗體可以避免丟失任何重要的HCP蛋白。
產(chǎn)品使用時一定要做好保護措施：0.5M硫磺酸有強腐蝕性，要避免接觸眼睛、皮膚和衣物。檢測前所有試劑都要平衡到室溫。 

檢測原理：
CHO檢測 是一個雙位點酶聯(lián)免疫檢測。樣本中包含的CHO HCPs蛋白與標(biāo)記有抗-CHO抗體的辣根過氧化物酶同時反應(yīng)，反應(yīng)發(fā)生在之前涂有一層吸附性抗-CHO蛋白抗體的微量滴定板中進行。免疫反應(yīng)構(gòu)成為夾層 式結(jié)構(gòu)：固相抗休-HCP-酶標(biāo)記抗體。反應(yīng)結(jié)束后清洗微量滴定板去除未結(jié)合反應(yīng)物。添加TMB作用底物反應(yīng)。微量滴定板讀數(shù)器上測定水解物濃度，水解物 濃度與CHO HCPs蛋白濃度成比例。用提供的標(biāo)準(zhǔn)液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)讀數(shù)可以計算出CHO HCPs蛋白含量。

檢測過程：
取出所有試 劑平衡到室溫→移取100µl anti-CHO:HRP（#F551）至每孔→分別移取50µl標(biāo)準(zhǔn)液，對照物和樣品至待測孔→密封滴定板，搖床室溫溫育2小時，180rpm→清空小 孔，用紙吸干殘留液，350µl清洗緩沖液清洗4次→加100µl TMB 作用物（#F005）→室溫靜置30分鐘，不需搖床→加100µl反應(yīng)終止液（#F006）→分光光度計450/650nm讀數(shù)

結(jié)果分析：
標(biāo)準(zhǔn)液（0, 1, 3, 12, 40, 100ng/mL）可用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)液濃度相當(dāng)于免疫反應(yīng)HCP總濃度。根據(jù)測定的小孔中標(biāo)準(zhǔn)液吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。數(shù)據(jù)分析可以使用計算機選配曲線，例如點到點，三次樣本函數(shù)，或四參數(shù)邏輯曲線。不要使用線性回歸分析修改樣品吸光值，這樣會出現(xiàn)顯著誤差。也可以手工繪圖，Y軸標(biāo)注吸光值，X軸標(biāo)注濃度。然后根據(jù)樣品吸光值計算出樣品中HCP濃度。（操作時每一濃度標(biāo)準(zhǔn)液都要重復(fù)滴定到兩個小孔中，以便計算平均分光光度值，樣品也需計算平均吸光值）。

 組成成份：
● Anti-CHO:HRP（辣根過氧化物酶）         1x12mL   F551（Product#）
● Anti-CHO微量滴定板                          12x8孔   F552
● CHO HCP標(biāo)準(zhǔn)液（0, 1, 3, 12, 40, 100ng/mL）    1mL/瓶 F553
● Stop Solution終止液（0.5M硫磺酸）        1x12mL F006
● TMB （3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯氨）                       1x12mL F005
● Wash Concentrate清洗物（20倍濃縮）             1x50mL   F004

 需自備物：
» 微量板分光光度計，雙波長450 & 650nm
» 移液器-50L and 100L
» 可重復(fù)使用或多通道移液器-100L
» 微量板搖床（150 - 200 rpm）
» 樣品稀釋液（推薦使用Cat # I028）
» 1L清洗瓶
» 蒸餾水

品名：Cygnus 宿主細胞蛋白ELISA檢測試劑盒 96T
貨號：F550
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